번호 검색 :0 저자 :사이트 편집기 게시: 2022-09-15 원산지 :강화 된
원칙적으로, 임상 유전자 증폭 실험실은 시약 저장 및 제조 영역, 샘플 제조 영역, 증폭 반응 혼합물 제조 및 증폭 영역 및 증폭 생성물 분석 영역의 4 가지 개별 작업 영역으로 나뉩니다. 교차 오염을 피하기 위해, 각 작업 영역에 들어가는 것은 단일 방향, 즉 시약 저장 및 준비 영역 → 샘플 준비 영역 → 증폭 반응 혼합물 제조 및 증폭 영역 → 증폭 제품 분석 영역에서만 엄격하게 따라야합니다.
실험 영역 사이의 시약 및 샘플의 전달은 전달 창을 통해 수행되어야한다.
(3) PCR 실험실의 에어컨 및 환기 시스템 설계 및 압력 제어
PCR 실험실에는 엄격한 정제 요구 사항이 없지만 다양한 실험 영역 간의 교차 오염 가능성을 피하기 위해 모든 전송 및 모든 방전의 공기 분포 형태를 채택하는 것이 적절합니다. 동시에, 각 실험 영역의 압력 요구 사항을 보장하기 위해 공기 공급 및 배기의 비율을 엄격하게 제어해야합니다.
시약 저장 및 준비 영역
이 실험 영역의 주요 작업은 저장 시약의 제조, 시약의 서브 포장 및 주요 반응 혼합물의 제조입니다. 시편 준비에 사용되는 시약 및 재료는이 지역으로 직접 운송되어야하며 다른 지역을 통과해서는 안됩니다. 시약 원료는이 지역에 보관 하고이 영역의 필수 보관 시약으로 준비해야합니다.
이 지역의 공기 흐름 압력 제어에 대한 엄격한 요구 사항은 없습니다.
시편 준비 영역
이 영역의 주요 작업은 임상 표본의 보존, 핵산 (RNA 및 DNA)의 추출 및 저장 및 증폭 반응 튜브에 첨가 될 때 cDNA의 합성이 측정된다.
이 영역의 압력 구배는 인접한 지역 에서이 지역으로 들어가는 에어로졸 오염을 피하기 위해 인접한 지역에 비해 양압이어야합니다. 또한 샘플링 작업 중에 에어로졸 오염이 발생할 수 있으므로 해당 지역의 불필요한 걷기를 피해야합니다.
증폭 반응 혼합물 제조 및 증폭 영역
이 영역의 주요 작업은 DNA 또는 cDNA 증폭입니다. 또한, 제조 된 DNA 주형 및 합성 된 cDNA (샘플 제조 영역)의 첨가 및 반응 혼합물로의 주요 반응 혼합물 (시약 저장 및 제제 영역으로부터)의 제조는 또한이 영역에서 수행 될 수있다. . 중첩 된 PCR 결정에서, 첫 번째 증폭 후에 반응 튜브를 열어야하므로 중첩 증폭은 오염 위험이 높으며 두 번째 샘플링은이 영역에서 수행되어야합니다.
이 영역의 압력 구배는이 영역에서 에어로졸 누출을 피하기 위해 인접한 영역에 비해 음압이어야합니다. 에어로졸으로 인한 오염을 피하려면이 지역에서 불필요한 걷기를 최소화해야합니다. 샘플 추가와 같은 개별 작업은 Ultra Clean Bench에서 수행되어야합니다.
증폭 제품 분석 영역
이 영역의 주요 작업은 증폭 된 단편의 결정입니다. 전수적 인 폐쇄 분석 기기를 탐지에 사용하는 경우이 영역이 설정되지 않을 수 있습니다.
이 영역은 증폭 생성물 오염의 주요 원천 이므로이 영역의 압력 구배는이 영역에서 다른 영역으로 확산되는 것을 방지하기 위해 인접한 영역에 비해 부 압력이어야합니다.
(4) 오염 방지 및 통제
PCR 실험실 설계의 핵심 문제는 오염을 피하는 방법입니다. 실용적인 작업에서 다음과 같은 유형의 오염이 일반적입니다. 증폭 제품의 오염; 천연 게놈 DNA의 오염; 시약 및 샘플의 오염. 오염이 발생하면 오염원이 발견 될 때까지 실험을 중단해야하며 실험 결과가 무효화되고 실험을 다시 수행해야합니다. 따라서, 오염이 발생한 후 실험실 주변의 오염원을 찾는 것은 시간이 많이 걸리고 번거롭지 않을뿐만 아니라 인력과 재료 자원을 낭비합니다. 따라서 오염을 피하기 위해 예방은 제거가 아니라 첫 번째 단계가되어야합니다.
